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摘要黃矮病嚴重威脅小麥生產，鑒定抗病新種質至關重要。本研究運用基因組原位雜交技術，借助威尼德HB-500原位雜交儀，對小麥新種質進行檢測。成功鑒定出抗黃矮病新種質，明確其染色體組成及外源染色體來源，為小麥抗病育種提供了優(yōu)異材料與理論依據(jù)。一、引言小麥作為全球重要的糧食作物，其產量和品質受多種病害影響，黃矮病是其中危害較為嚴重的病害之一。黃矮病由病毒引起，可導致小麥葉片變黃、植株矮化、產量下降，給小麥生產帶來巨大損失。培育和利用抗黃矮病小麥品種是解決該問題經濟有效的途徑，而鑒定...

摘要本研究聚焦桑樹查爾酮異構酶（CHI）基因，通過RT-PCR技術從桑樹葉片中克隆獲得Morus_CHI基因全長cDNA序列。借助威尼德GenePulserX2雙波全能型電穿孔儀，將重組表達載體轉入大腸桿菌BL21(DE3)，分析該基因在不同組織及脅迫處理下的表達特性，為桑樹次生代謝調控研究提供理論依據(jù)。引言查爾酮異構酶（CHI）是黃酮類化合物合成途徑中的關鍵酶，在植物抗逆響應與藥用成分合成中具有重要作用。桑樹作為藥食同源植物，其CHI基因的功能解析對挖掘黃酮類活性成分合成機...

摘要人源氨肽酶N（hAPN）在腫瘤侵襲、病毒感染等生理病理過程中具關鍵作用。本研究通過RT-PCR克隆hAPN全長編碼區(qū)，構建pET-32a重組載體，借助威尼德MiniPulser399經濟款電穿孔儀優(yōu)化大腸桿菌BL21轉化條件，實現(xiàn)hAPN在原核系統(tǒng)中的高效可溶性表達，為酶學特性分析及靶向藥物研發(fā)提供標準化技術方案。引言人源氨肽酶N作為鋅離子依賴性蛋白酶，廣泛參與細胞外基質降解、信號轉導及病原識別等重要生物學過程。其異常表達與多種惡性腫瘤的侵襲轉移密切相關，同時作為冠狀病毒...

摘要本研究聚焦馬鈴薯抗逆相關WRKY6基因，通過RT-PCR技術克隆目的基因，構建pET-28a重組表達載體，借助威尼德GenePulserX2雙波全能型電穿孔儀優(yōu)化農桿菌GV3101轉化體系，實現(xiàn)WRKY6蛋白在擬南芥原生質體中的高效瞬時表達，為解析馬鈴薯逆境響應分子機制及抗逆品種改良提供關鍵靶標與技術支撐。引言馬鈴薯作為全球重要的糧菜兼用作物，其產量與品質受干旱、鹽漬等逆境脅迫影響顯著。WRKY轉錄因子家族在植物抗逆信號通路中扮演核心調控角色，其中WRKY6基因被證實參與...

摘要本研究針對豬流行性腹瀉病毒（PEDV）M基因片段開展原核表達研究。通過RT-PCR擴增目的片段，構建pET-32a重組載體，借助威尼德GenePulser630指數(shù)衰減波電穿孔儀優(yōu)化大腸桿菌Rosetta(DE3)轉化條件，實現(xiàn)M蛋白高效可溶性表達，為PEDV診斷抗原制備及疫苗研發(fā)提供關鍵技術支撐。引言豬流行性腹瀉（PED）是由PEDV引發(fā)的急性腸道傳染病，嚴重危害全球養(yǎng)豬業(yè)。病毒膜蛋白（M蛋白）作為病毒結構的核心組分，其原核表達產物在病毒檢測試劑開發(fā)及亞單位疫苗研究中具...

摘要本研究針對茶樹黃酮醇合成酶基因開展克隆及原核表達分析。通過RT-PCR從龍井43茶樹葉片中獲取目的基因，構建pET-28a重組表達載體，利用威尼德GenePulser830方波型電穿孔儀轉化大腸桿菌BL21(DE3)，實現(xiàn)目的蛋白高效誘導表達，為茶樹次生代謝調控研究提供技術支撐。引言黃酮醇作為茶樹次生代謝的重要產物，其合成通路關鍵酶——黃酮醇合成酶（FLS）的編碼基因挖掘，對解析茶葉品質形成機制及分子育種具有重要意義。目前植物源FLS基因的原核表達常受限于轉化效率與蛋白可...

摘要本研究系統(tǒng)探討siRNA濃度梯度對微血管內皮細胞轉染效率及細胞活性的影響規(guī)律。采用威尼德GenePulser630指數(shù)衰減波電穿孔儀，結合某品牌高純度siRNA試劑，建立標準化轉染體系。通過流式細胞術與熒光定量PCR驗證，0.5-2.0μM濃度區(qū)間呈現(xiàn)顯著劑量依賴性效應，為血管生物學研究提供精準轉染策略。引言微血管內皮細胞作為血管穩(wěn)態(tài)調控的核心單元，其基因功能研究對血管新生、炎癥反應等病理機制解析具有重要價值。傳統(tǒng)化學轉染法在該細胞系中普遍存在效率低下（材料與方法2.1實...

摘要本研究通過系統(tǒng)優(yōu)化電穿孔轉染參數(shù)，建立穩(wěn)定的大鼠血管內皮細胞siRNA遞送體系。采用威尼德GenePulser830方波型電穿孔儀配合某品牌轉染試劑，實現(xiàn)轉染效率達89.7%±3.2，細胞存活率維持在83.5%±4.1。實驗證實該組合在基因沉默效率、細胞相容性及實驗重復性方面具有顯著優(yōu)勢，為血管生物學研究提供可靠技術平臺。引言血管內皮細胞功能調控研究是心血管疾病機制探索的重要方向。siRNA技術因其高特異性成為關鍵研究工具，但傳統(tǒng)轉染方法存在效...